Лабораторное занятие № 7

Тема: КУЛЬТИВИРОВАНИЕ И ИНДИКАЦИЯ ВИРУСОВ.

БАКТЕРИОФАГИ

Цель: усвоить способы культивирования и индикации вирусов,

способы получения и титрования бактериофагов и их

практическое внедрение.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:

1. Значение открытия Д.И. Ивановского. Этапы развития вирусологии, роль российских ученых в развитии вирусологии.

2. Структура и хим состав вирусов и бактериофагов.

3. Типы взаимодействия вируса с клеточкой, стадии Лабораторное занятие № 7 репродукции, финалы.

4. Способы культивирования вирусов. Индикация вирусов.

5. Бактериофаги. Взаимодействие фага с клеточкой. Умеренные

и вирулентные фаги. Лизогения.

6. Получение и титрование фагов. Применение фагов в медицине, микробиологии и биотехнологии.

7. Внутривидовая идентификация микробов (биовары, серовары, фаговары и т.д.). Эпидемическое маркирование.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Провести овоскопию куриного зародыша, заразить его

вируссодержащим материалом. Провести вскрытие Лабораторное занятие № 7 ранее зараженного зародыша, зрительно оценить состояние оболочек.

2. Обрисовать типы культур клеток, их отличия.

3. Изучить питательные среды для культур клеток: Хенкса, Игла, 199.

4. Изучить и зарисовать способы индикации вирусов:

а) цитопатическое действие - промикроскопировать и зарисовать культуры фибробластов в норме и с ЦПД;

б) реакция гемагглютинации – поставить РГА для индикации вируса в исследуемом материале Лабораторное занятие № 7, оценить и зарисовать;

в) реакция гемадсорбции – зарисовать с таблицы;

г) включения в пораженных клеточках – зарисовать с таблиц тельца Бабеша-Негри при бешенстве, тельца Гварниери при натуральной оспе, внутриядерные включения при аденовирусной инфекции;

д) реакция бляшкообразования – с таблицы;

е) «цветная проба» - зарисовать и оценить готовую реакцию.


5. Разобрать особенности строения Лабораторное занятие № 7 и зарисовать структуру

бактериофага.

6. Обрисовать метод получения бактериофага.

7. Учитывать и зарисовать результаты титрования фага по Аппельману

и по Грациа.

8. Учитывать и зарисовать готовые результаты фагодиагностики: реакции

фаголизиса и фаготипирования.

9. Обрисовать препараты фагов, применяемые для диагностики, исцеления

и профилактики болезней.

10. Уборка рабочего места.

11. Защита протокола.

Работа № 1: Техника овоскопии, инфецирования и вскрытия куриного

Зародыша

Овоскопия: поместить Лабораторное занятие № 7 зародыш на овоскоп и карандашом отметить границу воздушной полости.

Строение 12-дневного куриного зародыша


воздушная хорион - аллантоисная

полость оболочка (ХАО)

зародыш аллантоисная полость

амниотическая желточный мешок

полость

белок

Инфецирование: скорлупу над воздушной полостью протирают спиртом, обжигают на огне, смазывают 2% настойкой йода, опять протирают спиртом и обжигают. Для инфецирования на ХАО изогнутыми ножницами срезают скорлупу над воздушной полостью Лабораторное занятие № 7, пинцетом снимают часть подскорлупной оболочки, исследуемый материал в объеме ________ наносят на ХАО (конец иглы не должен быть ниже границы воздушной полости). Отверстие в скорлупе закрывают покровным стеклом и заливают воском либо парафином.

Для инфецирования в аллантоисную полость через прокол в скорлупе вводят иглу шприца так, чтоб конец иглы был ниже уровня Лабораторное занятие № 7 воздушной полости на ______. Отверстие в скорлупе заливают воском.


Вскрытие куриных зародышей проводят с соблюдением правил асептики. Скорлупу над воздушной полостью обрабатывают так же, как при инфецировании, и срезают ножницами чуток выше границы прикрепления хорион-аллантоисной оболочки. Зрительно оценивают состояние ХАО (помутнение, наличие бляшин и т.д.). Аллантоисную жидкость Лабораторное занятие № 7 насасывают пипеткой после прокола ХАО в месте, лишенном больших кровеносных сосудов. Потом ХАО разрезают ножницами и через отверстие выливают все содержимое в чашечку Петри. Амниотический мешок так же разрезают, высвобождают от зародыша, просматривают на наличие поражений.

Работа №2: Культуры клеток для культивирования вирусов

Характеристики Первичные Полупереви- ваемые Перевиваемые
Отличия от начальной Лабораторное занятие № 7 ткани
Набор хромосом
Длительность жизни
Время генерации (деньки)
Признаки озлокачествления
Полосы клеток


lapchatka-pryamostoyachaya-doklad.html
lapi-soedinennie-punktirnoj-liniej-perestavlyayutsya-odnovremenno.html
lapsha-pshenichnaya-grechnevaya-funchoza-neri-chyornie-spagetti-s-chernilami-karakatici.html